在進行兔ELISA試劑盒的操作時,需要遵循一系列的步驟以確保實驗的準確性和可靠性。以下是詳細的操作流程:
1、準備試劑
將所有試劑充分混勻,避免產生大量泡沫。
使用前確保所有試劑在室溫下平衡至少30分鐘。
2、標準品的稀釋與加樣
根據說明書進行標準品的稀釋,并設置標準品孔。
在酶標包被板上設標準品孔,依次加入不同濃度的標準品。
3、加樣
分別設空白孔和待測樣品孔。
在待測樣品孔中先加樣品稀釋液,再加待測樣品,輕輕晃動混勻。
4、溫育
用封板膜封板后置37℃溫育,時間根據說明書要求。
5、配液
將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。
6、洗滌
小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置后棄去,重復多次。
7、加酶
每孔加入酶標試劑,空白孔除外。
8、顯色
每孔先加入顯色劑A,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,避光顯色。
9、終止
每孔加終止液,終止反應。
10、測定
以空白孔調零,依序測量各孔的吸光度(OD值)。
此外,在整個操作過程中,還需要注意以下事項:
1、確保試劑盒從冷藏環境中取出后在室溫平衡一段時間。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性。
4、請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
總的來說,通過以上步驟和注意事項,可以有效地進行兔ELISA試劑盒的操作,并獲得可靠的實驗結果。